在使用奥希替尼之前，患者需接受EGFR基因突变检测，确认是否存在EGFR敏感突变（如外显子19缺失或L858R点突变）以及T790M耐药突变，这是决定患者是否适合奥希替尼治疗的关键。
若患者在奥希替尼治疗过程中出现耐药，需再次进行基因检测以明确耐药机制。这包括检测EGFR基因的再次突变（如C797S突变）、旁路通路的激活（如MET扩增、HER2扩增等）以及其他可能的耐药相关基因变异。
检测样本通常首选组织样本，但在组织样本难以获取的情况下，可选择血液样本进行检测。血液样本检测具有无创、可重复取样的优点。
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