甲状腺癌分子诊断

发布时间：2018-04-09    点击量： 次

甲状腺癌分子诊断。甲状腺癌，一种内分泌腺恶性肿瘤，在近几年来，它的发病率逐年上升。当病魔的来临时，为了避免我们措手不及，所以，对于这种病症我们需要有所了解，今天海得康凡德他尼直邮网小编为您介绍甲状腺癌的分子诊断：

甲状腺癌（TC）的发生是一系列遗传和表观上的改变，包括：体细胞突变的激活及失活、基因表达模式的改变、微小 RNA调节异常和基因异常甲基化。大部分都为体细胞突变，其中包括：点突变和染色体改变。在此部分，涉及到了常见的基因变异及对其对 TC处理上的影响，也提及了相关分子诊断技术。

1、遗传学改变

有文献报道了，甲状腺癌的遗传学改变包括：丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路及磷酸肌醇 -3-激酶（PI3K）/AKT信号通路。在这些非重叠的遗传学改变中，70%的甲状腺乳头状癌（PTCs）证实发现了BRAF、RAS、RET/PTC癌基因；70%的甲状腺滤泡癌（FTC）证实发现了 RAS及 PAX8/PPARc癌基因；低度分化及未分化癌中可见 TP53 及 CTNNB1癌基因。

无论是家族性还是分散性的甲状腺髓样癌（MTC）在 RET基因或者 RAS基因上常发生点突变。这些突变基因的标记、基因表达的改变及微小 RNA谱已经在甲状腺结节的诊断中探讨了其作用，其中一些已在临床上得到应用。BRAF是研究最多的癌基因之一，也是甲状腺癌遗传学改变最常见的突变基因。

2、BRAF基因点突变

BRAF编码的蛋白是丝氨酸 -苏氨酸激酶，其由 RAS蛋白激活并转运结合到质膜后可以改变细胞的位置。甲状腺癌 BRAF基因通过点突变而被激活。最常见的是第 1799位单个碱基错义突变（T1799A）导致翻译蛋白质第 600位密码子的缬氨酸（Valine）被谷氨酸（Glutamate）替换，成为活化蛋白质激酶（BRAF V600E)。其中甲状腺癌 BRAF 突变有 99%为 BRAF V600E突变。乳头状癌遗传学改变中最常见的类型就是 BRAFV600E氨基酸置换且 40%-45%的肿瘤已被确认会发生 BRAFV600E突变。

在典型的乳头状及高细胞甲状腺癌、1/3的髓样癌和未分化癌中都被证实有 BRAF基因突变。去分化型拥有分化型甲状腺癌的特点（如两者都包括 BARF基因突变），这说明分化型可以进展为去分化型。一项多学科的研究表明，BRAF与淋巴结转移，甲状腺外扩散，疾病晚期（III期和 IV期）及癌复发密切相关。之前还认为，BRAF基因突变与 PTC复发后与放射碘亲和力的缺失密切相关，致使放射性碘 131治疗抵抗。此项发现也被其他研究所证实。

普遍认为，BRAF基因突变会导致很多肿瘤促进分子的过度表达，比如血管内皮生长因子（VEGF）及肝细胞生长因子（MET）。在国际多中心学科中，研究结果也说明了 BRAF基因突变与甲状腺乳头状癌死亡率密切关系。一项基于前瞻性研究的 Meta分析报道了超过 5000份甲状腺细针穿刺标本的最终病理及 BRAFV600E蛋白检测的结果，最终显示 BRAF基因突变将导致 99.3%患癌风险。

鉴于 BRAF基因突变与 PTC的易转移性及癌症复发后放射碘亲和力缺失密切相关，因此手术根治切除突变阳性的癌灶很重要。在本文中，比如对于微小乳头状癌（小于或者等于 1mm）术式的选择上，美国甲状腺协会推荐应该施行甲状腺腺叶切除，但是如果术前检测BRAF显示阳性，推荐甲状腺全切才安全。

另外，大于5mm的微小型甲状腺乳头状癌也推荐全切，因为大于5mm比小于5mm的甲状腺癌复发率将明显提高。因为基于多种敏感性和特异性的PCR扩增技术，术前细针抽吸细胞学样本检测BRAF的方法（比如比色法检测突变试验）简单可行。

鉴于 BRAF基因突变与 PTC复发（甚至是低危癌复发）之间的密切关系，因此术前检测对于常规显示低危但BRAF基因突变阳性的患者判断复发更具有意义。因此，建议临床医生处理这些患者时可通过放射碘消融正常的甲状腺组织以提高甲状腺球蛋白（TG）检测的可靠性。

此外，检测 BRAFV600E 是预测中央区淋巴结转移的一项相当可靠的方法。因此术前检测 BRAFV600E结果显示阳性的甲状腺乳头状癌患者比首次广泛切除更有益处。随机化临床试验一直在研究是否预防性施行 PTC中央区淋巴结清扫会提高患者预后，但是术前检测 BRAF将会对扩大切除甲状腺及淋巴结的范围做出指导。

另外，BRAFV600E通过基因调控肿瘤基础微环境以触发肿瘤的浸润及转移，从而对 PTC进展到 ATC中起重要的作用。此外，甲状腺癌患者检测 BRAFV600E可以为潜在肿瘤的进展及将来是否使用选择 BRAFV600E靶向治疗阻滞剂提供重要的信息。总之，以上的研究表明，放射碘 131抵抗及手术不能够治愈的甲状腺癌患者可适用于抗 BRAFV600E疗法。

已经有文献报道，对于早期甲状腺癌与微小癌中 BRAFV600E和疾病高侵袭性特点之间存在关联。已运用BRAF基因变异联合其他导致不利预后的因素（如年龄、特殊病理类型）对甲状腺微小癌及癌症大者进行危险分级。这将对甲状腺癌患者将来个体化手术治疗及术后管理带来益处。

3、RET/PTC基因重排

尽管甲状腺乳头状癌可能在第 10号染色体上隐匿 RET/PTC1及 PTC3基因重排，但是 RET基因被认为在髓样癌中与种系或者体细胞突变最为密切相关。平均 20%的相关文献表明此种基因重排具有高度变异性。异质性可能归因于检测敏感性的变异度及细胞克隆的差异。在临床上，RET/PTC基因变异与因年轻或者辐射暴露而患癌相关。

组织学诊断上来讲，RET/PTC1在典型的甲状腺乳头状癌中常见；而 RET/PTC3在罕见的实性亚型中常见，这是一种有争议但具有高度侵袭性的由不同基质包围的实性层状细胞组成的组织亚型。从预后方面来讲，RET/PTC1与淋巴结转移相关；但是，变异与肿瘤演化为低分化或者未分化不相关。

已经在细胞学样本中通过单项测试及更大型的分子面板证实了RET对诊断的作用 --RET 的使用对形态学不确定的标本提供益处。对于一个细胞学不确定的标本，如果 RET显示阳性就需要甲状腺全切（如同 BRAF阳性）。由于 RET与典型变异 PTC的区域淋巴结转移相关，故 RET阳性对判断预后提供益处（如同 BRAF阳性）。

在一个多机构研究中，97例 PTC患者比较了遗传学改变 (BRAF, RET, RAS）、组织形态学、临床表现及预后特点。作者发现，RET基因重排与区域淋巴结转移高发呈正相关，BRAF与高肿瘤分期相关，RAS与低危的滤泡型乳头状癌相关。

4、RAS点突变

FNAB细胞学未明确的标本常是因为 RAS基因发生了突变。RAS基因包括 HRAS、KRAS、NRAS及特定密码子核苷酸置换。RAS在细胞膜上编码 G蛋白从而 G蛋白在激活酪氨酸激酶 /MAPK通路。在大部分人类肿瘤中都隐匿着 RAS基因中 KRAS基因第 12/13位密码子的点突变，而甲状腺肿瘤通常存在 NRAS第 61位密码子点突变或者 HRAS第 61位密码子点突变。

由于 RAS在甲状腺良恶性肿瘤都存在，因此限制了其在诊断中的运用。45%的滤泡型乳头状癌和 26%的滤泡性癌都存在 RAS基因突变。在滤泡状腺癌中，囊性肿瘤 RAS常阳性，浸润性肿瘤 RAS常阴性。这表示 RAS与肿瘤惰性相关。另外在低分化及未分化癌甚至是髓样癌中均发现了 RAS，这显示了 RAS与这些肿瘤的侵袭性临床病程相关。RAS可作为癌细胞亚型的一个标记，可以显示形态学分化良好但已有潜在转移及去分化的癌灶。

在连续检测甲状腺 FNA样本中，RAS突变是第二大常见的变异类型并具有重大的诊断意义。在少数前瞻性研究中显示，RAS突变对诊断恶性具有 74%-88 %阳性预测值。在甲状腺结节中检测 RAS基因突变虽不能确定恶性诊断，但可以为诊断肿瘤提供了有利凭证。检测 RAS基因作为一种标记滤泡型乳头状癌癌细胞，它的重要性在于其他方式难于判断结节性质，尤其是 FNA细胞学难于诊断时。但有些 RAS阳性的结节最终诊断为良性滤泡状肿瘤，这就导致了假阳性率。

5、PAX8/PPARc基因重排

PAX8/PPARc基因重排是第2号染色体q13与第3号染色体p25发生了异位。PAX8/PPARc基因重排是FTC中继于RAS后第二大常见的遗传学改变，大概占FTCs的30%-40%，占甲状腺Hu¨rthle 癌的5%。在临床上，FTCs中PAX8PPARc阳性多发生在年轻患者。此种变异与滤泡状原位/浸润前癌的关系尚未清楚。只检测PAX8PPARc重组阳性不能诊断为恶性。在组织学或者细胞学样本中检测PAX8PPARc对进一步的诊断分析提供了暗示。

6、分子诊断技术

临床实验室里有很多方法允许在几种样本中检测分子的变异。样本包括但不局限于血液、 口腔试子样本、新鲜速冻组织、FNA活组织样本及福尔马林固定石蜡包埋组织。临床实验室中常用的分析技术包括：DNA测序、免疫细胞化学 (ICC)、荧光原位杂交、PCR和许多相关 PCR技术的延伸包括逆转录 PCR、实时 PCR、聚合酶链反应单链构象多态性分析。分析候选蛋白标记物的 ICC技术虽然在技术上的变化会引起结果解释的差异，但是因价格便宜成为是一种受欢迎的诊断手段。

半乳糖凝集素 3（GAL3）是最多研究的标记物，它与细胞粘附、细胞周期调控、细胞凋亡及肿瘤进展相关。一项 Meta分析显示，最常用于检测单一标记物额 ICC技术检测 GAL3时显示出了最高的敏感性（85%）及特异性（90%）。每种检测方法必须调整以适应满足诸如病理学、内科内分泌学及外科学等临床服务的需要。

对于甲状腺癌的治疗，小编建议大家使用凡德他尼，它是第一个被FDA批准的治疗症状性或者进展性甲状腺髓样癌的抑制剂。如果有朋友需要咨询或者购买，可以联系海得康凡德他尼直邮网。